鲤春病毒血症病毒分离与分子生物学检测检测
1对1客服专属服务,免费制定检测方案,15分钟极速响应
发布时间:2025-05-14 05:38:54 更新时间:2025-05-13 05:38:55
点击:0
作者:中科光析科学技术研究所检测中心
1对1客服专属服务,免费制定检测方案,15分钟极速响应
发布时间:2025-05-14 05:38:54 更新时间:2025-05-13 05:38:55
点击:0
作者:中科光析科学技术研究所检测中心
鲤春病毒血症(Spring Viremia of Carp, SVC)是由鲤春病毒血症病毒(SVCV)引起的一种高度传染性鱼类疾病,主要感染鲤鱼、锦鲤等鲤科鱼类,具有高致死率和快速传播的特点。该病毒属于弹状病毒科(Rhabdoviridae),可通过水体、病鱼分泌物或污染物传播,引发鱼体出血、腹水、鳃部病变等症状,对水产养殖业造成严重经济损失。为有效防控疫情,病毒分离与分子生物学检测技术成为诊断SVCV感染的核心手段,相关检测项目、仪器、方法及标准需严格遵循国际和国内规范。
SVCV检测主要包括以下项目:
1. 病毒分离与培养:通过细胞培养分离病毒,观察细胞病变效应(CPE)。
2. 核酸检测:针对SVCV特异性基因片段(如糖蛋白G基因、核蛋白N基因)进行RT-PCR、qRT-PCR或核酸杂交分析。
3. 抗体检测:利用ELISA或免疫荧光技术检测血清中的病毒特异性抗体。
4. 病理学检查:对病鱼组织进行切片观察,确认典型病理变化。
核心检测仪器包括:
1. 细胞培养系统:CO₂培养箱、倒置显微镜(用于观察细胞病变)。
2. 分子生物学设备:PCR仪、实时荧光定量PCR仪、电泳系统及凝胶成像仪。
3. 核酸提取工具:高速离心机、微量分光光度计(检测RNA纯度与浓度)。
4. 免疫学设备:酶标仪(ELISA检测)、荧光显微镜(免疫荧光分析)。
1. 病毒分离法:
- 取病鱼内脏或组织匀浆液,接种于EPC(鲤上皮瘤细胞)或FHM(肥头鲤细胞)系。
- 25℃培养5-7天,观察CPE(如细胞圆缩、脱落)。
- 通过电镜或免疫学方法确认病毒颗粒。
2. RT-PCR检测:
- 提取病毒RNA,反转录为cDNA。
- 使用特异性引物(如SVCV-F: 5'-GTCATGGACTCAAACTC-3',SVCV-R: 5'-CATCAGAAAGTGGTCCAG-3')扩增目标片段。
- 电泳分析产物大小(预期条带约300-500 bp)。
3. 实时荧光定量PCR:
- 采用TaqMan探针法,定量检测病毒载量,灵敏度可达10^1拷贝/μL。
4. 免疫学方法:
- 制备SVCV单克隆抗体,通过ELISA或免疫荧光技术快速筛查样本。
国内外主要参考标准包括:
1. 国际标准:OIE《水生动物疾病诊断手册》中SVCV检测规程。
2. 国家标准:GB/T 15805.5-2018《鱼类检疫方法 第5部分:鲤春病毒血症病毒检测》。
3. 行业标准:SN/T 1675-2013《鲤春病毒血症检疫技术规范》。
4. 实验规范:需符合生物安全二级(BSL-2)实验室操作要求,避免交叉污染。
鲤春病毒血症的精准检测需结合病毒分离、分子生物学和免疫学技术,依托标准化仪器与操作流程。实验室需严格遵循OIE及国家标准,确保检测结果的可靠性和可比性,为疫情预警和防控提供科学依据。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
证书编号:ISO9001-2024001
版权所有:北京中科光析科学技术研究所京ICP备15067471号-33免责声明