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对虾传染性皮下和造血器官坏死病病毒核酸检测

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发布时间：2025-05-16 02:56:39 更新时间：2025-05-15 02:56:40

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

对虾传染性皮下和造血器官坏死病病毒（IHHNV）核酸检测的重要性

对虾传染性皮下和造血器官坏死病（Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis, IHHN）是由IHHNV病毒引起的一种高度传染性甲壳类动物疾病，主要感染南美白对虾、斑节对虾等经济虾类。该病毒可通过垂直传播（亲虾携带）和水平传播（水体、饵料等）扩散，感染后会导致幼虾生长迟缓、畸形甚至大规模死亡，对全球对虾养殖业造成严重经济损失。由于IHHNV潜伏期长且临床症状非特异性，核酸检测成为早期诊断和防控的核心手段。通过检测病毒核酸，可精准识别携带者、阻断传播链，并为种苗筛选和疫区管理提供科学依据。

检测项目

IHHNV核酸检测的主要目标为病毒基因组中的特异性片段。病毒属于细小病毒科（Parvoviridae），其单链DNA基因组包含两个开放阅读框（ORF1和ORF2）。检测通常针对保守区域，如编码非结构蛋白的ORF1或衣壳蛋白的ORF2，确保检测的特异性和灵敏度。此外，检测项目还包括样本的采集与预处理、核酸提取质量评估以及阳性对照设置，以排除假阴性或假阳性结果。

检测仪器

核酸检测需依赖专业仪器完成，核心设备包括：
1. PCR扩增仪：用于病毒DNA的扩增，需具备精确温控功能；
2. 核酸提取仪：自动化提取虾组织或水体样本中的病毒核酸；
3. 电泳仪及凝胶成像系统：用于PCR产物的分离与可视化分析；
4. 实时荧光定量PCR仪（qPCR）：实现病毒核酸的定量检测，灵敏度更高；
5. 超微量分光光度计：评估提取核酸的纯度与浓度。

检测方法

IHHNV核酸检测主要采用以下方法：
1. 常规PCR法：设计特异性引物扩增病毒DNA片段，通过电泳检测目标条带；
2. 实时荧光定量PCR（qPCR）：利用TaqMan探针或SYBR Green染料实现实时监测，可定量分析病毒载量；
3. 巢式PCR：通过两轮扩增提升检测灵敏度，适用于低病毒载量样本；
4. 等温扩增技术（如LAMP）：无需复杂设备，适合现场快速筛查；
5. 测序验证：对阳性样本进行测序比对，确认病毒基因型及变异情况。

检测标准

IHHNV核酸检测需遵循国际及行业标准，包括：
1. 世界动物卫生组织（OIE）手册：规定检测流程与结果判读要求；
2. GB/T 25878-2010（中国国家标准）：对虾IHHNV检测技术规范；
3. SN/T 1675-2013（出入境检验检疫标准）：进出口对虾中IHHNV的PCR检测方法；
4. 实验室质量控制要求：包括阴性/阳性对照设置、重复检测及交叉污染防控措施。