猪细小病毒核酸检测
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发布时间:2025-05-16 03:14:03 更新时间:2025-05-15 03:14:05
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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猪细小病毒(Porcine Parvovirus, PPV)是一种严重危害养猪业的病原体,主要导致母猪繁殖障碍,包括胚胎死亡、木乃伊胎、弱仔及不孕等症状。该病毒通过垂直传播和水平传播感染猪群,具有高度传染性和环境耐受性,尤其在规模化养殖场中容易引发疫情。随着分子生物学技术的发展,核酸检测因其高灵敏度和特异性,成为PPV早期诊断、疫情监测和防控的关键手段。通过核酸检测,能够快速识别病毒携带猪只,阻断传播链,为猪群健康管理和疫苗免疫效果评估提供科学依据。
猪细小病毒核酸检测的主要项目包括:
1. 病毒DNA检测:通过特异性引物扩增PPV的VP2基因片段,确认样本中是否存在病毒核酸。
2. 病毒载量定量:采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术,测定病毒拷贝数,评估感染严重程度。
3. 基因分型检测:针对不同PPV毒株的基因变异区域进行分析,用于流行病学溯源和毒株鉴别。
核酸检测需依赖专业仪器完成,主要包括:
- 实时荧光定量PCR仪:用于病毒核酸扩增和实时监测荧光信号,支持绝对定量分析。
- 核酸提取仪:自动化提取样本中的病毒DNA,提高检测效率和一致性。
- 电泳仪及凝胶成像系统:用于常规PCR产物的分离与结果验证。
- 超微量分光光度计:检测核酸纯度及浓度,确保扩增质量。
PPV核酸检测的核心方法为PCR技术,具体步骤如下:
1. 样本采集与处理:采集母猪胎盘、胎儿组织或血清样本,经裂解液处理后释放病毒核酸。
2. 核酸提取:使用磁珠法或离心柱法纯化DNA,去除样本中的抑制物。
3. PCR扩增:设计特异性引物(如VP2基因引物),通过热循环仪进行DNA扩增。qPCR可结合探针实现实时检测。
4. 结果分析:通过扩增曲线(qPCR)或电泳条带(常规PCR)判定阳性/阴性,结合标准曲线计算病毒载量。
PPV核酸检测需遵循以下标准以确保准确性:
- 国家标准:《GB/T 22917-2008 猪细小病毒病诊断技术》规定了病毒分离、血清学及分子检测方法。
- 行业规范:农业农村部《动物疫病检测实验室技术规范》要求实验环境、质控品设置及结果判读标准。
- 国际参考:世界动物卫生组织(OIE)《陆生动物诊断试验手册》推荐使用qPCR作为PPV确诊方法。
- 试剂盒标准:商业化检测试剂盒需通过灵敏度(≤10拷贝/μL)、特异性(无非特异性扩增)及重复性(CV<5%)验证。
通过标准化的检测流程和严格的质控管理,猪细小病毒核酸检测可为猪场疫病防控提供精准的技术支持,有效降低经济损失。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
证书编号:ISO9001-2024001
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