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酶联免疫吸附试剂（盒）检测

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发布时间：2025-06-08 13:56:21 更新时间：2025-06-07 13:56:22

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

酶联免疫吸附试剂（盒）检测概述

酶联免疫吸附试剂盒（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种高度灵敏的免疫学检测技术，广泛应用于医学诊断、食品安全、环境监测和生物研究领域。该技术基于抗原-抗体特异性结合的原理，利用酶标记的抗体或抗原与目标分子反应，再通过底物显色反应实现定量或定性检测。ELISA试剂盒的核心优势在于其高特异性、可重复性和大规模筛查能力，适用于低浓度生物标志物的检测，如病毒、细菌、激素或肿瘤标志物。典型的ELISA试剂盒包含预包被的微孔板、酶联抗体、底物溶液、缓冲液和校准品等组件，操作简便且成本低廉。随着技术发展，ELISA已衍生出多种形式，包括直接法、间接法、夹心法和竞争法，可适应不同检测需求。在临床应用上，ELISA试剂盒是HIV、乙肝病毒、COVID-19抗体检测的金标准，同时在食品安全中对过敏原和毒素进行快速筛查。然而，其局限性包括潜在的非特异性结合干扰和较长检测时间，需结合严格的质控措施。

检测项目

酶联免疫吸附试剂盒的检测项目涵盖多种生物标志物，主要分为以下几类：传染病标志物（如HIV抗体、乙肝表面抗原、流感病毒核酸）、激素水平（如甲状腺素、胰岛素、孕酮）、肿瘤标志物（如PSA、CEA、AFP）、过敏原（如花生蛋白、乳清蛋白）以及环境污染物（如农药残留、重金属离子）。具体项目中，夹心ELISA常用于病毒抗原检测，其灵敏度可达pg/mL级别；而竞争ELISA则适用于小分子激素或药物残留分析。这些检测项目广泛应用于临床实验室（如血清学诊断）、食品安全实验室（如肉类掺假检测）和制药行业（如药物代谢监测），需根据样本类型（血液、尿液、组织提取液）调整优化方案。

检测仪器

ELISA试剂盒的检测过程依赖于专用仪器，核心设备包括：微孔板读数器（酶标仪），用于测量显色反应的吸光度值，常用波长范围为450-630nm，其精度直接影响结果准确性；自动洗板机，确保微孔板在步骤间高效清洗，减少背景干扰；温控孵育箱，维持反应温度（通常37°C）稳定；以及自动化液体处理系统（如移液机器人），提高加样精度和通量。辅助仪器包含微孔板振荡器（促进均匀混合）和数据分析软件（如SoftMax Pro），支持标准曲线绘制和结果判读。现代仪器如多功能酶标仪可集成荧光或化学发光模式，拓展检测范围。选购时需考虑仪器精度（CV值低于5%）、通量（如96孔或384孔板兼容）和维护成本，以确保符合ISO 13485标准要求。

检测方法

ELISA试剂盒的标准检测方法遵循四步流程：第一步，包被阶段，将抗原或抗体固定于微孔板表面，通过4°C过夜孵育实现；第二步，封闭阶段，加入牛血清白蛋白或脱脂奶溶液，阻止非特异性结合；第三步，孵育步骤，添加样本和酶联抗体，在37°C下反应30-60分钟，期间需轻柔振荡；第四步，显色与检测，加入底物（如TMB），在酶催化下产生颜色变化，用终止液（如硫酸）中止反应后，通过酶标仪读取OD值。方法变体包括直接ELISA（单步抗体标记）和夹心ELISA（双抗体夹心目标抗原）。关键控制点包括样本稀释优化（避免高浓度基质效应）、重复检测（N≥3）和空白对照设置。整个操作应在无菌环境下进行，耗时2-4小时，灵敏度可达0.1-10 ng/mL。

检测标准

酶联免疫吸附试剂盒的检测标准主要依据国际和行业规范，确保结果可靠性。核心标准包括：ISO 13485（医疗器械质量管理体系），对试剂盒生产和质控提出要求；CLSI EP17-A2指南（临床实验室标准协会），规定灵敏度、特异性和精密度验证方法；以及FDA 21 CFR Part 820（美国食品药品监督管理局），涵盖临床试验审批。具体检测标准涉及：校准曲线线性（R²≥0.98）、检测限（LOD）和定量限（LOQ）计算（基于信噪比）、批间精密度（CV＜10%）和回收率测试（85-115%）。此外，方法需符合GB/T 5750-2006（中国国标）或EU IVDD（欧盟体外诊断指令）对特定项目的阈值要求。实验室应定期进行室间质评（EQA），并使用标准品（如WHO参考物质）进行交叉验证，以维持认证资质。